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厭氧菌培養(yǎng)方法

更新時間:2020-03-03點擊次數(shù):2564

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實際情況選用。
  1.厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。
  2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內(nèi)裝氣體發(fā)生管美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內(nèi)在半小時內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài),可以孵育。
  3.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)即厭氧培養(yǎng)箱,是迄今為止上*的培養(yǎng)厭氧菌佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作,故名。箱側(cè)有一交換室,具有內(nèi)外二門,內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關(guān)上外門進(jìn)行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達(dá)到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開,將物品移入箱內(nèi),關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究,大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié)。
4.厭氧盒:原理同厭氧袋,有成品銷售。
5.生物耗氧法:在一密閉的容器內(nèi)放以生物(多是植物),消耗氧氣,同時產(chǎn)生二氧化碳,供細(xì)菌生長用。我沒見過。
6.焦性末食子酸法:在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細(xì)菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應(yīng)后耗氧。該法用于厭氧不嚴(yán)格的厭氧菌的培養(yǎng),簡單。如有梭狀芽孢桿菌。
7.皰肉培養(yǎng)基:本身就是一個不需特殊設(shè)備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環(huán)境。
操作室厭氧環(huán)境形成:按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個無毒塑料袋。通電源開照明燈,開控溫儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。關(guān)緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗。操作室內(nèi)次置換(氮氣置換):先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋。接通氮氣進(jìn)氣路,打開氮氣控制閥,使二只塑料袋充足氮氣,然后扎緊袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。把塑料袋內(nèi)氮氣漸漸地放于操作室內(nèi),至全部放出。操作室第二次置換(氮氣置換)重復(fù)一 次充氮過程,并注意隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣。操作室第三次置換(混合氣體置換):(混合氣體配比為:N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%)調(diào)換氣路打開混合氣道通閥門進(jìn)氣,充氣時要隨時腳踏開關(guān)開閉排氣。混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經(jīng)過流量計輸入操作并調(diào)整流量計,流量為每分鐘10毫升左右。把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。通過三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。操作室內(nèi)打開鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一 小時后打開美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。開紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時間自定。

TEL:0571-86139637

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